پذیرفته شده برای ارائه شفاهی

کد مقاله : 1163-CSERC (R1)

¹سید جلیل ذریه زهرا ؛ ²فاطمه حسن تبار؛ ³فرید فیروزبخش؛ ⁴کیم تامپسون

¹مدیر بخش بهداشت و بیماری های آبزیان

²دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری

³داتشگاه منابع طبیعی و کشاورزی ساری

⁴Moredun Research Institute

تشخیص سریع بیماری و حذف سریع ماهیان آلوده در مراحل اولیه بیماری امری ضروری برای کنترل موثر شیوع بیماری در محیط های محصور دریائی و نیز مزارع آبزی پروری است. هدف اساسی در این تحقیق طراحی و تهیه یک روش سنجش به منظور تشخیص سریع و آسان نمونه های آلوده به ویروس (VNN)بود. در روش ایمنوکروماتوگرافی پادتن نشاندار شده با ذرات کلوئیدی طلا بر سایر نشانگرها ارجحیت دارد. ذرات طلا 30 نانومتری با غلظت های مناسبی از پادتن و در pH مشخصی پوشانیده شده و با آلبومین سرم گاوی پایدار گردیدند. سپس طراحی کیت ایمنوکروماتوگرافی برای تشخیص بتانوداویروس انجام شد. به این منظور حجم های مختلف کونژوگه طلا-پادتن بر روی پد کونزوگه ریخته و سپس مقادیر مختلف پلی کلونال آنتی بادی در خط تست قرار گرفت. همچنین به منظور تایید و اطمینان از عملکرد کونزوگه طلا-پادتن، خط کنترل حاوی پادتن ثانویه بر علیه پادتن موشی در منطقه مورد نظر قرار گرفت. در نهایت اجزای کیت تکمیل و نمونه مغز کفال ماهیان مشکوک مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نشان داد که این کیت قادر به شناسایی 103 بتانودایروس می باشد. در مرحله نهایی نیز 50 نمونه سوپرناتانت مغز ماهی کفال طلائی که با استفاده از روش Real-time PCR و ایمونوهیستوشیمی، قبلا آلودگی آنها تایید شده بود با استفاده از کیت مزبور مورد ارزیابی قرار گرفتند. بطور کلی حساسیت و ویژگی این روش به ترتیب 64 و 100 درصد بود. صحت روش ایمونوکروماتوگرافی تقریبا با روش Real-time PCR و ایمونوهیستوشمی همخوانی دارد و در تست های غربالگری اپیدمیولوزیک می تواند بسیارمفید باشد.

کیت تشخیص سریع؛ پادتن؛ نانوذره طلا؛ ایمونوهیستوشیمی؛ نکروز عصبی ویروسی